通過(guò)熒光蛋白和其色移性遺傳變異體顯示出了廣泛的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜曲線(xiàn)設(shè)計(jì)使用兩個(gè)或更多的同時(shí)這些**探針的活細(xì)胞成像實(shí)驗(yàn)時(shí)，往往需要專(zhuān)門(mén)的考慮。主要關(guān)注的是從顯著程度的排放而導(dǎo)致的譜法，熒光蛋白的組合重疊通常表現(xiàn)出潛在的出血，經(jīng)過(guò)文物。這種互動(dòng)式的教程探討匹配的熒光蛋白雙標(biāo)記的調(diào)查與問(wèn)候光譜帶寬和重疊，激發(fā)效率，發(fā)射窗口的尺寸，并且需要設(shè)計(jì)合理的實(shí)驗(yàn)等參數(shù)。

教程初始化與從熒光蛋白（CFP蔚藍(lán)色和HcRed - 串聯(lián)）中出現(xiàn)的光譜曲線(xiàn)窗口重疊在汞弧光放電燈的發(fā)光光譜的一個(gè)有用的組合的吸收和熒光發(fā)射光譜圖。還包括在初始化時(shí)該窗口是適當(dāng)?shù)臒晒鈭F(tuán)的二色性反射鏡的配置文件，以及用于發(fā)射濾波器帶寬配置文件建議的出發(fā)點(diǎn)。鼠標(biāo)光標(biāo)可用于拖動(dòng)沿著光譜曲線(xiàn)窗口的波長(zhǎng)軸的灰階發(fā)射濾波器帶寬的界限來(lái)確定*佳位置。上為每個(gè)發(fā)射濾波器的控制的右手側(cè)的雙滑塊組合或箭頭按鈕可用于調(diào)整帶寬，中心波長(zhǎng)可以用左手箭頭按鈕來(lái)改變。拖動(dòng)左邊的滑塊也意味著整個(gè)圖形的帶寬配置，同時(shí)拖動(dòng)右邊滑塊增加或減少的帶寬大小。虛擬發(fā)射器的電流的中心波長(zhǎng)和帶寬的值被連續(xù)地更新，并且在紅色標(biāo)記上方的滑塊顯示。滲出到（如果有的話(huà)）的比例是不斷更新的每個(gè)信道和光譜曲線(xiàn)窗口的下方顯示。 

尼康顯微鏡該二色鏡滑塊控制這些元素的截止波長(zhǎng)曲線(xiàn)的位置，并且可以使用相鄰滑塊的顏色編碼的單選按鈕的每個(gè)信道之間進(jìn)行切換。同樣，汞燈的光譜分布可以通過(guò)停用激勵(lì)源復(fù)選框被關(guān)閉。 （默認(rèn)：水銀弧光燈）吸收（ab）和發(fā)射器（EM）頻譜的曲線(xiàn)可以通過(guò)從上方的照明源頭黃色顯示窗的框去除勾選被禁用。當(dāng)激光源被從照明下拉菜單選擇，基于在激光波長(zhǎng)處的摩爾消光系數(shù)的激勵(lì)效率百分比顯示在照明顯示窗口上方的綠色方塊。激光線(xiàn)，繪制顏色近似的頻譜配置文件窗口的波長(zhǎng)，可以通過(guò)禁用激勵(lì)源復(fù)選框被停用。為了保持當(dāng)前的教程的參數(shù)（顯示的激發(fā)和發(fā)射濾波器的配置文件等），而經(jīng)由探針或照明源的列表進(jìn)行切換，在維護(hù)狀態(tài)復(fù)選框可以啟用。新的熒光蛋白類(lèi)可以使用組單選按鈕的光譜曲線(xiàn)窗口右側(cè)選擇隨選擇的探討下拉菜單。 

在計(jì)算本教程的值所使用的吸收光譜和熒光發(fā)射光譜記錄在受控條件下進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，僅供比較和顯示的目的。在實(shí)際熒光顯微鏡調(diào)查，光譜曲線(xiàn)可能會(huì)因環(huán)境的影響，如pH，離子濃度，溶劑的極性，以及在局部探針濃度的波動(dòng)而變化，因此，可能不同于實(shí)驗(yàn)條件下實(shí)際觀察到。